微生物(wu)(wu)(wu)為(wei)廣泛(fan)分布(bu)于(yu)自然界中的(de)(de)一群(qun)肉眼看不到的(de)(de)微小生物(wu)(wu)(wu)，包括(kuo)細(xi)菌(jun)(jun)、螺旋體(ti)、立克次體(ti)、衣原體(ti)、支原體(ti)、放線(xian)菌(jun)(jun)、真菌(jun)(jun)、病毒等類(lei)，其結構(gou)簡單，以(yi)單細(xi)胞(bao)、細(xi)胞(bao)群(qun)體(ti)或(huo)非細(xi)胞(bao)狀態存在，在提供營養物(wu)(wu)(wu)質和適(shi)宜環境的(de)(de)條件下(xia)(xia)，一般(ban)都能(neng)獨立生活(huo)，迅速生長繁殖。為(wei)了避免微生物(wu)(wu)(wu)死亡、污染，保(bao)持其原有性狀基本穩定，便于(yu)研(yan)究(jiu)和使(shi)(shi)用，需要用到菌(jun)(jun)種保(bao)藏技術(shu)。菌(jun)(jun)種的(de)(de)保(bao)存主要是指通過降低細(xi)菌(jun)(jun)新陳代謝的(de)(de)速度, 使(shi)(shi)細(xi)菌(jun)(jun)的(de)(de)生命(ming)活(huo)動處(chu)于(yu)半yongjiu性休眠狀態, 以(yi)達到changqi保(bao)藏的(de)(de)目的(de)(de)以(yi)及減少菌(jun)(jun)種的(de)(de)更(geng)新需求來(lai)降低實驗生產成(cheng)本。微生物(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)種的(de)(de)保(bao)存方法由于(yu)微生物(wu)(wu)(wu)種類(lei)的(de)(de)不同而略有差距(ju)，接下(xia)(xia)來(lai)給大家介(jie)紹一些常見的(de)(de)菌(jun)(jun)種保(bao)存的(de)(de)方法：
1.低溫冷凍保藏法
該方(fang)法適合大多數(shu)需要(yao)(yao)changqi保(bao)(bao)存(cun)(cun)的(de)微生(sheng)物，病毒(du)等。原理為在(zai)超低(di)溫環境下時，微生(sheng)物代(dai)謝活動(dong)停止，一(yi)般溫度(du)越(yue)低(di)效果越(yue)好。使用凍存(cun)(cun)管對菌(jun)種(zhong)進行保(bao)(bao)存(cun)(cun)，同(tong)時需要(yao)(yao)保(bao)(bao)護劑(ji)，一(yi)般使用甘油、脫脂羊粉或者(zhe)二甲亞(ya)砜(feng)等保(bao)(bao)護劑(ji)。講(jiang)含有菌(jun)種(zhong)的(de)凍存(cun)(cun)管置(zhi)于-60~-80℃冰箱中冷凍保(bao)(bao)存(cun)(cun)。
2.液(ye)體石(shi)蠟保藏法
液(ye)體石(shi)(shi)蠟(la)(la)保(bao)(bao)藏法(fa)(fa)適(shi)用于一些(xie)(xie)不能分(fen)解石(shi)(shi)蠟(la)(la)的(de)菌(jun)(jun)類，例(li)如(ru)酵母菌(jun)(jun)、芽孢桿菌(jun)(jun)屬、青(qing)霉(mei)屬、曲霉(mei)屬等，一些(xie)(xie)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)和真菌(jun)(jun)并(bing)不適(shi)合用該(gai)方法(fa)(fa)進行保(bao)(bao)存(cun)(cun)。液(ye)體石(shi)(shi)蠟(la)(la)法(fa)(fa)使(shi)用液(ye)體石(shi)(shi)蠟(la)(la)覆蓋(gai)，微(wei)生(sheng)物(wu)代謝被抑制(zhi)，菌(jun)(jun)種(zhong)老化推遲(chi)。石(shi)(shi)蠟(la)(la)法(fa)(fa)可以防止氧氣(qi)進入(ru)，使(shi)得需氧菌(jun)(jun)無(wu)法(fa)(fa)繼(ji)續生(sheng)長(chang)，同時若培(pei)養基水分(fen)蒸(zheng)(zheng)發(fa)，容易導致(zhi)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)死亡(wang)，石(shi)(shi)蠟(la)(la)法(fa)(fa)可防止培(pei)養基水分(fen)蒸(zheng)(zheng)發(fa)，延(yan)長(chang)菌(jun)(jun)種(zhong)保(bao)(bao)存(cun)(cun)時間(jian)。無(wu)菌(jun)(jun)條(tiao)件下將滅菌(jun)(jun)的(de)液(ye)體石(shi)(shi)蠟(la)(la)注入(ru)剛培(pei)養好的(de)斜(xie)面(mian)培(pei)養物(wu)上，液(ye)面(mian)高出斜(xie)面(mian)頂端1cm~2cm，加(jia)膠塞并(bing)用固體石(shi)(shi)蠟(la)(la)封口(kou)，使(shi)菌(jun)(jun)種(zhong)與空(kong)氣(qi)隔絕。將注人石(shi)(shi)蠟(la)(la)油(you)的(de)菌(jun)(jun)種(zhong)斜(xie)面(mian)直立存(cun)(cun)放于低溫（4℃~6℃）干燥處或室溫下保(bao)(bao)存(cun)(cun)。
3.冷凍干燥保(bao)藏法
該(gai)方法適(shi)合(he)大多(duo)數(shu)微(wei)生物的(de)保(bao)(bao)(bao)存(cun)，但不適(shi)用(yong)于(yu)不產孢子的(de)絲(si)狀真(zhen)菌(jun)(jun)。冷凍干燥保(bao)(bao)(bao)藏法是(shi)在低(di)溫、干燥、缺氧條件(jian)下(xia)保(bao)(bao)(bao)藏菌(jun)(jun)種。即在低(di)溫條件(jian)下(xia)快速地(di)將菌(jun)(jun)種凍結，使(shi)微(wei)生物保(bao)(bao)(bao)持(chi)完整，然后(hou)(hou)減(jian)壓抽直(zhi)空(kong)使(shi)冰(bing)升(sheng)華直(zhi)至(zhi)脫水干燥，并在直(zhi)空(kong)狀態密封(feng)隔(ge)絕空(kong)氣，使(shi)微(wei)生物代謝活動停止，得以changqi保(bao)(bao)(bao)藏。按照一定配方配置保(bao)(bao)(bao)護(hu)劑加入安瓿(bu)管，然后(hou)(hou)再加入菌(jun)(jun)種制備成(cheng)菌(jun)(jun)懸液(ye)。先(xian)將安瓿(bu)管進(jin)行預凍存(cun)至(zhi)-15~-20℃，然后(hou)(hou)用(yong)冷凍真(zhen)空(kong)干燥機對(dui)安瓿(bu)管進(jin)行干燥，并將安瓿(bu)管進(jin)行熔封(feng)。（低(di)溫避光(guang)保(bao)(bao)(bao)存(cun)）
4.沙土管保藏(zang)法
該(gai)方法適(shi)合用(yong)(yong)(yong)于產孢類放線(xian)菌(jun)(jun)、芽孢桿菌(jun)(jun)等的保存，不(bu)適(shi)合以(yi)菌(jun)(jun)絲發(fa)育為(wei)主的真(zhen)(zhen)菌(jun)(jun)和病原性(xing)真(zhen)(zhen)菌(jun)(jun)的保藏。使(shi)用(yong)(yong)(yong)細沙(sha)(sha)(sha)土(tu)創造干(gan)(gan)(gan)燥條件，使(shi)那些能(neng)夠產生(sheng)(sheng)孢子(zi)或芽孢的微生(sheng)(sheng)物在(zai)干(gan)(gan)(gan)燥環(huan)境中(zhong)的代謝活動減緩，抑(yi)制(zhi)其繁殖速度，且抵抗力強不(bu)易死亡。該(gai)方法能(neng)減少菌(jun)(jun)株(zhu)突變，延長存活時間。將河(he)、海沙(sha)(sha)(sha)用(yong)(yong)(yong)60目(mu)(mu)過篩(shai)(shai)，棄去大顆(ke)粒及(ji)(ji)雜質，再用(yong)(yong)(yong)80目(mu)(mu)過篩(shai)(shai)，去掉(diao)細沙(sha)(sha)(sha)。用(yong)(yong)(yong)吸鐵石吸去鐵質，放入容器中(zhong)用(yong)(yong)(yong)10%鹽酸浸泡(pao)，如(ru)河(he)沙(sha)(sha)(sha)中(zhong)右機(ji)物較多可(ke)用(yong)(yong)(yong)20%鹽酸浸泡(pao)。24h后倒去鹽酸，用(yong)(yong)(yong)自來(lai)水浸泡(pao)數次(ci)至(zhi)中(zhong)性(xing)，將沙(sha)(sha)(sha)子(zi)烘(hong)于或曬干(gan)(gan)(gan)。另取未被污染的地表以(yi)下十壤用(yong)(yong)(yong)100日(ri)討(tao)篩(shai)(shai)，自來(lai)水洗至(zhi)中(zhong)性(xing)，烘(hong)干(gan)(gan)(gan)。按沙(sha)(sha)(sha)：土(tu)=2：1混合均勻(yun)，分裝人安(an)瓿管或小試管中(zhong)，高(gao)度為(wei)1cm左(zuo)右，塞好(hao)棉塞，121℃高(gao)壓滅菌(jun)(jun)1~1.5h，或常壓間歇滅菌(jun)(jun)3次(ci)、每(mei)天每(mei)次(ci)16。在(zai)50℃以(yi)下烘(hong)干(gan)(gan)(gan)（溫(wen)(wen)度不(bu)宜過高(gao)，影響菌(jun)(jun)種(zhong)性(xing)能(neng)），經檢(jian)查(cha)無微生(sheng)(sheng)物生(sheng)(sheng)長方可(ke)使(shi)用(yong)(yong)(yong)。之后制(zhi)備菌(jun)(jun)懸液(ye)并(bing)將菌(jun)(jun)懸液(ye)加入沙(sha)(sha)(sha)土(tu)管中(zhong)。講含有(you)菌(jun)(jun)懸液(ye)的沙(sha)(sha)(sha)土(tu)管放入真(zhen)(zhen)空干(gan)(gan)(gan)燥器中(zhong)進行真(zhen)(zhen)空干(gan)(gan)(gan)燥。使(shi)用(yong)(yong)(yong)火焰封(feng)融管口，存放于低溫(wen)(wen)（4℃~10℃）或常溫(wen)(wen)干(gan)(gan)(gan)燥處，定(ding)期檢(jian)查(cha)活力及(ji)(ji)雜菌(jun)(jun)情(qing)況。
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