蛋(dan)白質相互作用是指兩個或兩個以(yi)上蛋(dan)白質分(fen)子通過(guo)非(fei)共價鍵形成蛋(dan)白質復(fu)合物的(de)過(guo)程(cheng)。如復(fu)制、轉錄、翻譯、細胞周期調(diao)控(kong)、物質代謝等。
常(chang)見的研究(jiu)方法有：
酵母雙雜(za)交技術、免疫(yi)共(gong)沉淀(dian)、親和(he)層析、細(xi)胞內共(gong)定(ding)位分析。
以(yi)下是對免疫共沉(chen)淀技術（co-immunoprecipitation,co-IP）進(jin)行(xing)總結，co-IP常(chang)用(yong)來(lai)檢測兩種(zhong)蛋(dan)白質在(zai)體內是否(fou)結合。
基本原理：
在bao證兩(liang)種蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)相互作(zuo)用的(de)條件下(xia)，收(shou)(shou)集并裂(lie)解(jie)細胞(bao)。在細胞(bao)裂(lie)解(jie)液中(zhong)加(jia)入某一種已(yi)知(zhi)(zhi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)的(de)特(te)異性(xing)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)，孵育后再加(jia)入可(ke)與(yu)特(te)異性(xing)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)結(jie)合(he)(he)的(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)A/G-瓊脂(zhi)糖珠(zhu)（或磁(ci)珠(zhu)）沉淀收(shou)(shou)獲抗(kang)(kang)原抗(kang)(kang)體(ti)(ti)復合(he)(he)物(wu)(wu)，若細胞(bao)中(zhong)存在與(yu)已(yi)知(zhi)(zhi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)結(jie)合(he)(he)的(de)目(mu)標蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)，則(ze)可(ke)被磁(ci)珠(zhu)沉淀下(xia)倆，形成(cheng)“目(mu)標蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)-已(yi)知(zhi)(zhi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)-抗(kang)(kang)已(yi)知(zhi)(zhi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)-磁(ci)珠(zhu)”復合(he)(he)物(wu)(wu)。經SDS-PAGE后，復合(he)(he)物(wu)(wu)可(ke)被分離，再經免疫印跡(ji)或質(zhi)譜鑒定出目(mu)標蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)。
優(you)勢：
① 得到的(de)(de)蛋白質(zhi)相(xiang)互作用是在細(xi)胞內天然形成的(de)(de)，反映的(de)(de)是細(xi)胞的(de)(de)生理狀態(tai)；
② 可以分離得到天然狀(zhuang)態的(de)蛋白質(zhi)復(fu)合(he)物。
劣勢：
① 可能檢測不到低(di)親和力的瞬時蛋白質-蛋白質相(xiang)互(hu)作用；
② 不能證明兩種蛋白質的直(zhi)接結合，其(qi)他分子可能起到橋(qiao)梁作用；
③ 依賴于高(gao)質量的、可用于免疫沉淀的特異性抗體。
不同類(lei)型(xing)的免(mian)疫共(gong)沉淀技術
1、二(er)次免(mian)(mian)(mian)疫共沉(chen)淀技術(shu)：用(yong)來檢(jian)測細(xi)胞內三(san)種(zhong)蛋(dan)(dan)白質(zhi)間(jian)的(de)相互作(zuo)用(yong)，若要(yao)證明X、Y、Z三(san)種(zhong)蛋(dan)(dan)白質(zhi)間(jian)是否以復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)形式存在(zai)，先在(zai)細(xi)胞裂(lie)解液中加入抗(kang)(kang)X蛋(dan)(dan)白質(zhi)抗(kang)(kang)體(ti)，免(mian)(mian)(mian)疫沉(chen)淀獲得抗(kang)(kang)原抗(kang)(kang)體(ti)復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)，經過非變性(xing)洗脫后，向(xiang)此復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)溶液中加入抗(kang)(kang)蛋(dan)(dan)白質(zhi)Y的(de)抗(kang)(kang)體(ti)，再收集免(mian)(mian)(mian)疫復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)進行SDS-PAGE分析。
2、蛋白質(zhi)降解抑(yi)制-免(mian)疫共沉(chen)淀(dian)：若兩種蛋白質(zhi)結合后，其中一種會(hui)降解，則會(hui)影響IP實驗結果(guo)，故需(xu)要抑(yi)制細胞內蛋白質(zhi)降解。
① 對于通過溶酶體途(tu)徑(jing)降(jiang)解(jie)的蛋(dan)白質，可以加入NH4Cl或氯(lv)喹改(gai)變細(xi)胞內酸性環境，抑制這類蛋(dan)白質降(jiang)解(jie)。
② 對(dui)于通過泛素(su)-蛋白(bai)酶體途徑降(jiang)解的蛋白(bai)質，可用(yong)MG132抑制，該試劑對(dui)細胞有毒性，故作用(yong)時間不能太久。
3、核(he)質(zhi)(zhi)分(fen)離-免疫共沉淀(dian)：體內的許多蛋白質(zhi)(zhi)是在細胞質(zhi)(zhi)和細胞核(he)之(zhi)間穿(chuan)梭的，研究時有時會(hui)出現(xian)時空問題。故(gu)先(xian)利用核(he)質(zhi)(zhi)分(fen)離技術得到細胞核(he)或細胞質(zhi)(zhi)完整的組分(fen)。
4、交聯免疫共沉(chen)淀(dian)：能(neng)夠使已經結(jie)(jie)合(he)在一起的蛋(dan)白(bai)質(zhi)更加(jia)穩定。避免結(jie)(jie)合(he)能(neng)力弱或瞬時結(jie)(jie)合(he)的蛋(dan)白(bai)質(zhi)在實驗過程(cheng)中降解。
原創作者：上(shang)海恒遠生物科技有限(xian)公司
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