無(wu)(wu)(wu)血(xue)(xue)清(qing)(qing)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)是在(zai)合(he)成培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)(ji)礎上發展起來的(de)(de)(de)(de)(de)，和傳統的(de)(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)不一(yi)樣的(de)(de)(de)(de)(de)是，它(ta)既能滿足細(xi)胞在(zai)體外長時(shi)(shi)間(jian)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)的(de)(de)(de)(de)(de)要求，也能避免動物血(xue)(xue)清(qing)(qing)中所(suo)帶來的(de)(de)(de)(de)(de)不利因素。無(wu)(wu)(wu)血(xue)(xue)清(qing)(qing)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)發展歷程(cheng)分(fen)為無(wu)(wu)(wu)血(xue)(xue)清(qing)(qing)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)、無(wu)(wu)(wu)動物源(yuan)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)、無(wu)(wu)(wu)蛋白培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)及化學成分(fen)限定培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)四類(lei)。在(zai)使(shi)用無(wu)(wu)(wu)血(xue)(xue)清(qing)(qing)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)時(shi)(shi)，有(you)些細(xi)胞需要逐漸適應，即先(xian)將原來的(de)(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)與無(wu)(wu)(wu)血(xue)(xue)清(qing)(qing)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)混合(he)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)，再轉為完整的(de)(de)(de)(de)(de)無(wu)(wu)(wu)血(xue)(xue)清(qing)(qing)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)。有(you)些貼(tie)壁生長的(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)胞，復蘇時(shi)(shi)也可(ke)用少量(liang)的(de)(de)(de)(de)(de)血(xue)(xue)清(qing)(qing)先(xian)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)（血(xue)(xue)清(qing)(qing)可(ke)以幫助細(xi)胞貼(tie)壁），然后再轉為無(wu)(wu)(wu)血(xue)(xue)清(qing)(qing)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)。
無血清(qing)培養基(ji)由營(ying)養較wan全的基(ji)礎培養基(ji)和補充(chong)因子組成：
一(yi)、基礎培養基
在不同(tong)細(xi)胞(bao)培養(yang)時，根據細(xi)胞(bao)需求對成分已知的(de)(de)基礎培養(yang)基組分進行適當調(diao)整(zheng)即可使(shi)細(xi)胞(bao)更好地生長并(bing)提高目的(de)(de)產物的(de)(de)表達量。大多數人工合(he)成的(de)(de)培養(yang)基如DMEM、DMEM/F12、1640。
二、補充因子
補(bu)充(chong)因(yin)子(zi)是代(dai)替(ti)血清的各種因(yin)子(zi)的總稱(cheng)，大部分的無血清培(pei)養液(ye)必(bi)(bi)須要補(bu)加3-8種因(yin)子(zi)，像胰島素、亞(ya)硒suan鈉和轉鐵蛋白是必(bi)(bi)須補(bu)充(chong)因(yin)子(zi)，其他多數(shu)為輔助作用(yong)的因(yin)子(zi)。
補充(chong)因(yin)子(zi)的功能不同可分為五類：
1.激素和生長因子
很(hen)多細(xi)胞(bao)用無血(xue)清(qing)培養(yang)時需要加入激素(su)(su)，如(ru)胰島(dao)素(su)(su)、生長激素(su)(su)、胰高(gao)糖(tang)素(su)(su)等(deng)(deng)。胰島(dao)素(su)(su)是重(zhong)要的(de)細(xi)胞(bao)存活因子(zi)，與細(xi)胞(bao)上(shang)的(de)胰島(dao)素(su)(su)受體結合后可促進RNA、蛋白質和脂肪(fang)酸(suan)的(de)合成，抑(yi)制(zhi)細(xi)胞(bao)凋亡。（雌二醇、孕(yun)酮(tong)等(deng)(deng)也是無血(xue)清(qing)培養(yang)基中常添加的(de)補充(chong)因子(zi)）
2.結合蛋(dan)白(bai)
常見如(ru)轉(zhuan)鐵蛋白(bai)(bai)和牛血(xue)清白(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)轉(zhuan)鐵蛋白(bai)(bai)與(yu)細胞上(shang)的(de)(de)(de)轉(zhuan)鐵蛋白(bai)(bai)受(shou)體結合是細胞獲取鐵元素的(de)(de)(de)主要(yao)來源。白(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)與(yu)脂類、激素、維生素、金屬離子和生長因子結合后可(ke)調節上(shang)述物質在無(wu)血(xue)清培養基中活性(xing)的(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)。（牛血(xue)清白(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)添加的(de)(de)(de)量(liang)一般比較大，增加培養基的(de)(de)(de)粘度(du)，保(bao)護細胞不受(shou)機械損傷）
3.貼壁因(yin)子
許多細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)一定要貼壁才(cai)能生長，這(zhe)種情況下無(wu)血清培養基中一定要添加促貼壁和擴(kuo)展的(de)因(yin)子(zi)，一般為細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)外基質，（如纖(xian)粘連蛋(dan)白(bai)、膠原(yuan)蛋(dan)白(bai)等）它們還是(shi)重要的(de)分裂素以及維(wei)(wei)持正(zheng)常細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)功能的(de)分化因(yin)子(zi)，對許多細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)繁殖和分化起著重要的(de)作用。纖(xian)粘連蛋(dan)白(bai)主要促進來自中胚層細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)貼壁與分化，這(zhe)些細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)包(bao)括成纖(xian)維(wei)(wei)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)、肉瘤細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)、粒細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)、腎(shen)上皮細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)、腎(shen)上腺皮質細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)、CHO細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)、成肌細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)、CHO細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)等。
4.酶抑制劑(ji)
培養(yang)貼壁(bi)生長的(de)細(xi)胞，需要用胰酶(mei)消(xiao)化(hua)傳代，在無(wu)血清培養(yang)基(ji)中(zhong)必不可少須(xu)含酶(mei)抑(yi)制劑，以終止酶(mei)的(de)消(xiao)化(hua)作用，達到保(bao)護細(xi)胞的(de)目(mu)的(de)。（常用的(de)是大豆胰酶(mei)抑(yi)制劑）
5.其(qi)他補充因子。
一些細胞培(pei)養(yang)使用的無血清培(pei)養(yang)基還需要補充微量元素、維(wei)生素、脂類等低(di)分子量物質。
無血清培養基的優點：
1）避免血(xue)清(qing)不同批次間的質量(liang)差異，提高(gao)細胞培養實(shi)驗(yan)結果的一致(zhi)性。
2）避免血清對細胞的毒性作用和血清源性污染。
3）避(bi)免血清(qing)組分對實驗研(yan)究的影響。
4）有(you)利于(yu)體外培養細(xi)胞的分(fen)化。
5）可(ke)提高(gao)目(mu)的蛋白的表達量并使產(chan)品易于(yu)分離純(chun)化(hua)。
6）組分穩定，可大量生產。
7）不(bu)含(han)有絲分裂原抑制劑，可(ke)以促進細胞增(zeng)殖。
無血(xue)清培養基(ji)的缺點
1）細(xi)胞易受某些機械(xie)和化學因素的影響，培養基(ji)(ji)沒有傳統合成培養基(ji)(ji)方便(bian)。
2）成(cheng)本高。
3）針(zhen)對(dui)性(xing)強，一種無血(xue)清培養(yang)基僅(jin)適合某一類細胞的(de)培養(yang)。
4）不同(tong)細胞對培(pei)養及營(ying)養成(cheng)分(fen)的需求不同(tong)。
5）雖(sui)然(ran)(ran)不添(tian)加動物(wu)血清(qing)，但為了(le)細胞的(de)生(sheng)長，培養基中依然(ran)(ran)包含大量動植(zhi)物(wu)來源(yuan)蛋白，添(tian)加物(wu)質的(de)化學成分也不夠(gou)明確。
三、生(sheng)產(chan)生(sheng)物制品
目(mu)，生(sheng)(sheng)產生(sheng)(sheng)物活性蛋白、疫苗、單克(ke)隆抗(kang)體(ti)和(he)基因(yin)治療藥物的(de)表(biao)達載體(ti)等生(sheng)(sheng)物制(zhi)品時一般(ban)都采用可(ke)高密度生(sheng)(sheng)長(chang)的(de)動物工(gong)程(cheng)(cheng)細胞(bao)(bao)。無血清培養技術的(de)運(yun)用，給動物工(gong)程(cheng)(cheng)細胞(bao)(bao)提供了更優(you)的(de)條件，進而表(biao)達更多的(de)目(mu)的(de)產物，并有利(li)于后續目(mu)的(de)產物的(de)分離和(he)純(chun)化。
四、基(ji)礎(chu)研究域
雖然基礎培(pei)養(yang)基加少(shao)量血清所配制(zhi)的(de)wan全(quan)培(pei)養(yang)基可以滿(man)足大部分(fen)細胞培(pei)養(yang)的(de)要(yao)求，但(dan)對(dui)有(you)些實驗卻不適合。
【如，在利用(yong)DC腫瘤疫(yi)苗治療時，所需要(yao)的樹突狀細(xi)胞和(he)用(yong)于抗原致敏的腫瘤細(xi)胞，往(wang)往(wang)在胎牛血清(qing)中(zhong)進行培養，這就很難分(fen)辨(bian)哪些(xie)免(mian)疫(yi)反應是(shi)由(you)血清(qing)引起(qi)的而(er)不是(shi)真正(zheng)的先天(tian)免(mian)疫(yi)系(xi)統的作用(yong)，需要(yao)使用(yong)成分(fen)明確(que)的無血清(qing)培養基排除動(dong)物血清(qing)的干擾。】
原創(chuang)作者：上海恒遠生物科技有限(xian)公司
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