一(yi)、原代細胞培養(yang)的應用
1.為(wei)研究生物體(ti)細胞的(de)生長、代謝、繁殖提(ti)供有力的(de)手(shou)段；
2.為傳代培養創造(zao)條(tiao)件；
3.服務于(yu)臨床實踐，用于(yu)藥物(wu)篩選等。
二、原代(dai)細(xi)胞培養的分離注意事項
1、組織(zhi)塊培養法
1）組(zu)織塊(kuai)接(jie)種后的(de)3天，在(zai)觀察和(he)移動的(de)過程中(zhong)，注意不(bu)要(yao)引起液體的(de)振(zhen)蕩。要(yao)避免經常翻(fan)動和(he)振(zhen)動，否則組(zu)織塊(kuai)不(bu)易附著(zhu)于瓶(ping)壁上或(huo)附著(zhu)后也(ye)會脫落飄(piao)起。
2）加入的(de)培養液不宜過多，避免浸泡(pao)的(de)組織塊受輕(qing)微的(de)波動而脫落下來。
3）當細(xi)胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織(zhi)塊和殘留的細(xi)胞，它們產(chan)生(sheng)的有毒物質會影響原代細(xi)胞的生(sheng)長。
4）為促(cu)進組織塊盡快粘貼在培養(yang)瓶(ping)皿上(shang)，可以在種植先將膠(jiao)原薄層涂在培養(yang)瓶(ping)底(di)壁上(shang)。
2、貼(tie)壁型(xing)原代細胞
1)原代(dai)培養的(de)(de)分離細(xi)胞(bao)在初次接觸(chu)體外環(huan)境時，它們之(zhi)間(jian)會(hui)(hui)互相(xiang)影響(xiang)，在這些細(xi)胞(bao)之(zhi)間(jian)能產生(sheng)一些促生(sheng)長的(de)(de)活性(xing)物質，使(shi)細(xi)胞(bao)彼(bi)此互相(xiang)促進(jin)存活和生(sheng)長。如果接種的(de)(de)細(xi)胞(bao)密度過低，細(xi)胞(bao)之(zhi)間(jian)的(de)(de)促生(sheng)長作用(yong)很小，也很難使(shi)細(xi)胞(bao)適應(ying)(ying)從體內的(de)(de)組織環(huan)境到被分散后(hou)進(jin)入獨立生(sheng)存環(huan)境的(de)(de)變化過程。如果接種的(de)(de)細(xi)胞(bao)密度過大，會(hui)(hui)導致營養物質供應(ying)(ying)不足(zu)，代(dai)謝廢物積累較快需要(yao)經常(chang)換(huan)液和傳代(dai)。
2）適當增大(da)原代培養接種的(de)細(xi)(xi)(xi)胞密(mi)度(du)，給培養的(de)細(xi)(xi)(xi)胞提供更(geng)多類(lei)似于在體內時(shi)細(xi)(xi)(xi)胞之間(jian)的(de)相互作(zuo)用，會大(da)提高原代培養的(de)細(xi)(xi)(xi)胞在體外(wai)存(cun)活率(lv)。待細(xi)(xi)(xi)胞適應體外(wai)環境(jing)后進行傳代培養時(shi)再(zai)以較低(di)的(de)密(mi)度(du)接種和培養。
3）盡快使接種的細胞貼(tie)(tie)壁，是(shi)決(jue)定培(pei)(pei)養(yang)能否成(cheng)功(gong)的關鍵。可(ke)以在接種后先將培(pei)(pei)養(yang)瓶置培(pei)(pei)養(yang)箱(xiang)內培(pei)(pei)養(yang)3小(xiao)時到(dao)5小(xiao)時，待細胞貼(tie)(tie)壁后，再補足培(pei)(pei)養(yang)液繼續培(pei)(pei)養(yang)。
3、懸浮型原代細(xi)胞(bao)
1）必須保持(chi)細胞的(de)(de)(de)懸(xuan)浮(fu)狀態，可(ke)(ke)以通(tong)過增加培(pei)養(yang)液(ye)的(de)(de)(de)黏度來幫助(zhu)細胞呈(cheng)懸(xuan)浮(fu)狀態，如給(gei)培(pei)養(yang)液(ye)中(zhong)加入(ru)低(di)濃度的(de)(de)(de)透(tou)明質(zhi)酸復合物(wu)。在有攪拌裝置的(de)(de)(de)培(pei)養(yang)器皿內加入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)，以5ml為zui低(di)限度，否則(ze)攪拌時會(hui)產生氣(qi)泡對細胞造成傷害。使(shi)用這種(zhong)方式(shi)需注(zhu)意勿使(shi)攪拌速度過快，否則(ze)即可(ke)(ke)使(shi)培(pei)養(yang)液(ye)溢出又容易(yi)造成污染。如果培(pei)養(yang)液(ye)的(de)(de)(de)量在5ml以下，可(ke)(ke)以采(cai)用旋轉瓶(ping)培(pei)養(yang)，給(gei)懸(xuan)浮(fu)培(pei)養(yang)的(de)(de)(de)細胞換液(ye)時要(yao)注(zhu)意不(bu)要(yao)吸出細胞。
2）能夠進行懸浮培養的細胞，其(qi)生(sheng)命力一般(ban)都比(bi)較旺盛，體外分(fen)裂增殖的速度較快，營(ying)養成分(fen)消(xiao)耗大，換(huan)液時間隔一般(ban)較短。
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