免(mian)疫(yi)熒光技(ji)(ji)術(shu)(shu)又稱熒光抗體(ti)(ti)技(ji)(ji)術(shu)(shu)，是標記免(mian)疫(yi)技(ji)(ji)術(shu)(shu)中發(fa)展zui早(zao)的(de)一(yi)(yi)種。它是在免(mian)疫(yi)學、生物(wu)化學和(he)顯微鏡技(ji)(ji)術(shu)(shu)的(de)基礎上建立(li)起來(lai)的(de)一(yi)(yi)項(xiang)技(ji)(ji)術(shu)(shu)。很(hen)早(zao)以(yi)來(lai)就有一(yi)(yi)些(xie)學者試圖將抗體(ti)(ti)分子與(yu)一(yi)(yi)些(xie)示(shi)蹤物(wu)質(zhi)結(jie)合，利用抗原抗體(ti)(ti)反應進(jin)行組織或細(xi)胞內抗原物(wu)質(zhi)的(de)定位。
該技術的主要特(te)點(dian)是：特(te)異(yi)性強、敏感性高、速度快。
主要缺(que)點是：非特異(yi)性(xing)染色問題尚未(wei)完(wan)quan解(jie)決(jue)，結果判定的客觀(guan)性(xing)不足，技術程(cheng)序也還比(bi)較(jiao)復雜。
一(yi)、原理
免(mian)疫(yi)學的(de)(de)基(ji)本(ben)反(fan)應(ying)是(shi)(shi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)-抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)反(fan)應(ying)。由于抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)反(fan)應(ying)具有(you)高度的(de)(de)特(te)(te)異(yi)性(xing)，所(suo)以當抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)發生(sheng)反(fan)應(ying)時，只(zhi)要知道其中的(de)(de)一(yi)(yi)個因(yin)素(su)，就可(ke)以查出另一(yi)(yi)個因(yin)素(su)。免(mian)疫(yi)熒光(guang)技術就是(shi)(shi)將不影響抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)活性(xing)的(de)(de)熒光(guang)色素(su)標記在(zai)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)（或抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)）上，與(yu)其相應(ying)的(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)（或抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)）結合(he)后(hou)，在(zai)熒光(guang)顯(xian)微鏡下(xia)呈(cheng)現一(yi)(yi)種特(te)(te)異(yi)性(xing)熒光(guang)反(fan)應(ying)。
直接(jie)法：將標(biao)記的(de)特(te)異性熒光(guang)抗(kang)體，直接(jie)加在抗(kang)原(yuan)標(biao)本上，經一定的(de)溫度和時間(jian)的(de)染(ran)色，用水洗去未(wei)參加反應的(de)多余熒光(guang)抗(kang)體，室溫下干燥后封片、鏡檢(jian)。
間接法：如檢(jian)查未知(zhi)(zhi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)，先用(yong)已知(zhi)(zhi)未標(biao)(biao)(biao)記(ji)(ji)的(de)特異(yi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體（di一(yi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體）與抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)標(biao)(biao)(biao)本進行(xing)反(fan)(fan)應，用(yong)水(shui)洗(xi)去未反(fan)(fan)應的(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體，再用(yong)標(biao)(biao)(biao)記(ji)(ji)的(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體（第二(er)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體）與抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)標(biao)(biao)(biao)本反(fan)(fan)應，使之(zhi)形成抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)—抗(kang)(kang)(kang)(kang)體—抗(kang)(kang)(kang)(kang)體復(fu)合物，再用(yong)水(shui)洗(xi)去未反(fan)(fan)應的(de)標(biao)(biao)(biao)記(ji)(ji)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體，干燥、封片后鏡檢(jian)。如果檢(jian)查未知(zhi)(zhi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體，則表明抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)標(biao)(biao)(biao)本是(shi)已知(zhi)(zhi)的(de)，待檢(jian)血清(qing)為di一(yi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體，其它步(bu)驟的(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)檢(jian)查相同。標(biao)(biao)(biao)記(ji)(ji)的(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體是(shi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)球(qiu)(qiu)(qiu)蛋(dan)白(bai)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體，同于血清(qing)球(qiu)(qiu)(qiu)蛋(dan)白(bai)有種的(de)特異(yi)性，如免疫(yi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)雞(ji)血清(qing)球(qiu)(qiu)(qiu)蛋(dan)白(bai)只對雞(ji)的(de)球(qiu)(qiu)(qiu)蛋(dan)白(bai)發(fa)生反(fan)(fan)應，因此，制備標(biao)(biao)(biao)記(ji)(ji)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體適用(yong)于雞(ji)任何抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)的(de)診斷(duan)。
二、技術分類：
1.熒光抗體(ti)技術（熒光顯(xian)微鏡技術）
抗原(yuan)抗體(ti)反應后(hou)，利用熒(ying)光顯(xian)微(wei)鏡判定結果的(de)檢測(ce)方(fang)法。
2.免疫熒光測定技術：
抗原抗體反應后，利用(yong)特殊(shu)儀器測(ce)定(ding)熒光強度而推(tui)算被(bei)測(ce)物濃度的(de)檢測(ce)方法。
1）熒光物質
熒光色素(su)
許多(duo)物質都可產生(sheng)熒(ying)(ying)光現(xian)象，但(dan)并(bing)非都可用作(zuo)熒(ying)(ying)光色(se)素。只有那些(xie)能(neng)產生(sheng)明顯的(de)熒(ying)(ying)光并(bing)能(neng)作(zuo)為染料使用的(de)有機化(hua)合物才能(neng)稱為免疫熒(ying)(ying)光色(se)素或(huo)熒(ying)(ying)光染料。
常用(yong)的熒光色素(su)：
（1）異(yi)硫氰酸熒光(guang)(guang)(guang)(guang)素為(wei)(wei)黃(huang)色或橙(cheng)黃(huang)色結晶粉末，易溶于水或酒精等溶劑。分子量為(wei)(wei)389.4，zui大吸收光(guang)(guang)(guang)(guang)波(bo)(bo)長為(wei)(wei)490495nm，zui大發(fa)射光(guang)(guang)(guang)(guang)波(bo)(bo)長520530nm，呈(cheng)現(xian)明(ming)亮的黃(huang)綠(lv)色熒光(guang)(guang)(guang)(guang)有兩種同(tong)分異(yi)結構(gou)，其中(zhong)異(yi)構(gou)體Ⅰ型在效率、穩定性、與蛋(dan)白質結合能(neng)力等方面都geng好，在冷暗(an)干(gan)燥(zao)處可保存多年，是應用zui廣(guang)泛的熒光(guang)(guang)(guang)(guang)素。
其(qi)主要(yao)優點(dian)是：
①人眼對(dui)黃綠(lv)色較為敏感
②通常切片標本中的綠色熒光少于(yu)紅色。
（2）四乙基羅(luo)丹明為(wei)橘紅(hong)色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙-酮。性質(zhi)穩定，可(ke)chang期(qi)保存。zui大吸收光波長為(wei)570nm，zui大發射光波長為(wei)595-600nm，呈橘紅(hong)色熒光。
（3）四甲基異(yi)硫(liu)氰(qing)酸羅丹明，zui大吸引光波(bo)(bo)長為550nm，zui大發射光波(bo)(bo)長為620nm，呈(cheng)橙紅色熒(ying)光。與(yu)FITC的翠綠色熒(ying)光對比(bi)鮮明，可配合用于雙重標記或對比(bi)染色。其異(yi)硫(liu)氰(qing)基可與(yu)蛋(dan)白(bai)質結(jie)合，但熒(ying)光效率較低。
常見熒光素的特性(xing)：
1）FITC：黃色(se)結晶粉末，吸收光：490～495nm，發射光：520～530nm，明亮的黃綠(lv)色(se)熒光。
2）RB200： 橘紅(hong)(hong)色粉末, 吸收光(guang)(guang)570nm，發射光(guang)(guang) 595～600nm，橘紅(hong)(hong)色熒光(guang)(guang)。
3）TRITC： 紫紅(hong)(hong)色(se)粉(fen)末(mo)，吸收550nm，發射光 620nm，橙(cheng)紅(hong)(hong)色(se)熒光。
4）鑭(lan)系：Eu3+、Tb3+
5）PE：吸收(shou)光(guang)490～560nm，發射光(guang) 595nm，紅色(se)熒光(guang)。
6）其它：酶作用后產生熒光物質。
原創作(zuo)者：上海恒遠生(sheng)物科技有(you)限公司(si)
總訪問量：7389377 
