AGES就(jiu)是糖基(ji)(ji)化(hua)(hua)終(zhong)末產物(wu)(wu)的(de)英文簡寫，它是非酶糖基(ji)(ji)化(hua)(hua)反(fan)應(ying)(Maillard反(fan)應(ying))的(de)終(zhong)末產物(wu)(wu)。是指蛋白質、脂質或(huo)核酸(suan)等(deng)大分子在沒有酶參與的(de)條件下，自發的(de)與葡萄糖或(huo)其他還原單糖反(fan)應(ying)所(suo)生成的(de)穩定的(de)共價加成物(wu)(wu)。本試(shi)劑盒用(yong)于測定斑馬魚血(xue)清，血(xue)漿及相關(guan)液體樣本中(zhong)晚期糖基(ji)(ji)化(hua)(hua)終(zhong)末產物(wu)(wu)(AGEs)含量。那么在ELISA實驗中(zhong)有哪(na)些注(zhu)意(yi)事項呢，恒遠生物(wu)(wu)小編為大家總結ELISA實驗操作注(zhu)意(yi)事項。
一(yi)、實(shi)驗原理
本(ben)試劑盒應用雙抗體夾心法測(ce)定標本(ben)中(zhong)斑(ban)馬(ma)(ma)魚(yu)晚期糖(tang)基(ji)化(hua)(hua)(hua)(hua)終(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)末(mo)(mo)(mo)產(chan)(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)(AGEs)水平。用純化(hua)(hua)(hua)(hua)的(de)(de)斑(ban)馬(ma)(ma)魚(yu)晚期糖(tang)基(ji)化(hua)(hua)(hua)(hua)終(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)末(mo)(mo)(mo)產(chan)(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)(AGEs)抗體包被(bei)微孔板(ban)，制成固相(xiang)抗體，往包被(bei)單抗的(de)(de)微孔中(zhong)依次加入(ru)晚期糖(tang)基(ji)化(hua)(hua)(hua)(hua)終(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)末(mo)(mo)(mo)產(chan)(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)(AGEs)，再(zai)與HRP標記的(de)(de)晚期糖(tang)基(ji)化(hua)(hua)(hua)(hua)終(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)末(mo)(mo)(mo)產(chan)(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)(AGEs)抗體結合，形(xing)成抗體-抗原-酶標抗體復(fu)合物(wu)(wu)(wu)，經(jing)過洗滌(di)后加底物(wu)(wu)(wu)TMB顯色(se)。TMB在(zai)HRP酶的(de)(de)催化(hua)(hua)(hua)(hua)下轉化(hua)(hua)(hua)(hua)成藍色(se)，并(bing)在(zai)酸的(de)(de)作(zuo)用下轉化(hua)(hua)(hua)(hua)成終(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)(de)深淺和樣品中(zhong)的(de)(de)晚期糖(tang)基(ji)化(hua)(hua)(hua)(hua)終(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)末(mo)(mo)(mo)產(chan)(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)(AGEs)呈(cheng)正(zheng)相(xiang)關。用酶標儀在(zai)450nm波長下測(ce)定吸光度（OD值(zhi)），通(tong)過標準曲線計算樣品中(zhong)斑(ban)馬(ma)(ma)魚(yu)晚期糖(tang)基(ji)化(hua)(hua)(hua)(hua)終(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)末(mo)(mo)(mo)產(chan)(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)(AGEs)濃(nong)度。
二(er)、標(biao)本要求
1．標本采(cai)集后(hou)(hou)盡早進行提(ti)取，提(ti)取按相關文獻進行，提(ti)取后(hou)(hou)應盡快進行實(shi)驗(yan)。若不(bu)能馬上進行試驗(yan)，可將標本放于-20℃保存(cun)，但應避(bi)免反復凍融
2．不能檢測(ce)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣(la)根(gen)過氧化物酶的（HRP）活性。
三(san)、注意事(shi)項
1．試劑盒從冷藏環(huan)境(jing)中取(qu)出應在室(shi)溫平衡15-30分鐘后方可(ke)使(shi)用，酶標包被板(ban)開(kai)封(feng)后如未用完，板(ban)條應裝入密封(feng)袋中保存。
2．濃洗滌(di)液可能(neng)會有結(jie)晶(jing)析出，稀釋時(shi)可在水浴中(zhong)加溫助溶，洗滌(di)時(shi)不影響結(jie)果(guo)。
3．各步加(jia)(jia)樣(yang)均應使(shi)用加(jia)(jia)樣(yang)器，并經常(chang)校對(dui)其準確性，以(yi)避免試(shi)驗誤差。一次加(jia)(jia)樣(yang)時間控制(zhi)在5分鐘內，如標本(ben)數(shu)量多，推薦使(shi)用排槍(qiang)加(jia)(jia)樣(yang)。
4．請每次測定(ding)的(de)(de)同時做標(biao)準曲線，做復孔(kong)。如標(biao)本中待測物質含量過(guo)高（樣(yang)本OD值大于標(biao)準品孔(kong)的(de)(de)OD值），請先用樣(yang)品稀(xi)釋(shi)液稀(xi)釋(shi)一(yi)定(ding)倍數(shu)（n倍）后再測定(ding)，計算時請乘(cheng)以總稀(xi)釋(shi)倍數(shu)（×n×5）。
5．封板(ban)膜只限一次性使用，以避免交叉污染(ran)。
6．底物(wu)請避光保存。
7．嚴(yan)格按照說明書的操作進行(xing)，試驗結果判定(ding)必(bi)須(xu)以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗(xi)滌液和各種(zhong)廢棄物都(dou)應按傳染物處理(li)。
9．本試劑(ji)不同批號組分不得(de)混(hun)用(yong)。
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