Elisa實(shi)(shi)驗(yan)是(shi)一種(zhong)敏感(gan)性(xing)(xing)高(gao)，特異(yi)性(xing)(xing)強，重復性(xing)(xing)好(hao)的(de)實(shi)(shi)驗(yan)診斷方法(fa)。由于其試劑穩定、易(yi)保存，操(cao)(cao)作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣(guang)(guang)泛(fan)應用(yong)在免(mian)疫(yi)學(xue)檢驗(yan)的(de)各域中(zhong)。ELISA檢測試劑盒適(shi)用(yong)于體(ti)外定性(xing)(xing)檢測人血(xue)清或血(xue)漿中(zhong)的(de)抗人類戊型肝炎(HEV)病毒(du) IgM 抗體(ti)ELISA檢測。ELISA法(fa)由于操(cao)(cao)作簡略，已被廣(guang)(guang)泛(fan)應用(yong)，咱們就來談談ELISA試劑盒需(xu)把握的(de)關(guan)鍵有哪些(xie)？
1.在儲存及孵育過程中(zhong)(zhong)避(bi)免將(jiang)試劑暴露在強(qiang)光中(zhong)(zhong)。一(yi)切試劑瓶蓋須(xu)蓋緊以避(bi)免蒸(zheng)發和污染，試劑避(bi)免受到微生物的(de)污染，因為蛋白水解酶的(de)干(gan)擾將(jiang)導致呈(cheng)現錯誤(wu)的(de)結果(guo)。
2.小心汲(ji)取試(shi)劑并嚴格遵守給定的孵育時(shi)刻和溫(wen)度。請(qing)注意在汲(ji)取標本/規范品，酶結合物或底物時(shi)，diyi個孔與zuihou一個(ge)孔加樣之間(jian)的時刻距(ju)離假如(ru)太大，將會導(dao)致不同的 “預孵育”時刻，然后明顯地影響到測量值(zhi)的準確性及(ji)重復性。
3.試劑盒保存(cun)：部分試劑保存(cun)于(yu)-20℃，部分試劑保存(cun)于(yu)2-8℃，具體以標簽上的標示(shi)為準(zhun)。
4.濃洗滌液會有鹽(yan)分出，稀釋時可在水浴中加(jia)溫助溶。
5.剛敞開(kai)的酶(mei)聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常(chang)現(xian)象(xiang)，不會對試驗結果造成任何影響(xiang)。
6.一切的樣(yang)品(pin)(pin)都應管(guan)理(li)好，依照規則的程(cheng)序處理(li)樣(yang)品(pin)(pin)和檢測設備。
通常我們(men)可用于ELISA檢測(ce)(ce)的(de)樣(yang)本(ben)是(shi)有多種(zhong)類型的(de)，如血(xue)清(qing)、血(xue)漿(jiang)、尿液、細(xi)胞培養上清(qing)或(huo)組織勻漿(jiang)液等(deng)，不(bu)同類型的(de)檢測(ce)(ce)樣(yang)本(ben)期的(de)處理(li)方(fang)法是(shi)不(bu)一樣(yang)的(de)。正確(que)(que)(que)的(de)處理(li)樣(yang)本(ben)是(shi)ELISA檢測(ce)(ce)的(de)正確(que)(que)(que)性(xing)和(he)準確(que)(que)(que)性(xing)的(de)yi步，下面(mian)簡單介紹一下細(xi)胞裂解液樣(yang)本(ben)及組織勻漿(jiang)樣(yang)本(ben)的(de)正確(que)(que)(que)采(cai)集(ji)、處理(li)方(fang)法。
細(xi)胞(bao)裂解液：
1.吸去(qu)培養(yang)板(ban)內的培養(yang)基，用胰酶消化細胞，加適(shi)量培養(yang)基將細胞從培養(yang)板(ban)上吹下(xia)來。懸浮細胞可(ke)省略。
2.收集細胞懸液，1000×g離(li)心10min，棄去培養基，用預冷的PBS潤洗3次。
3.加入(ru)適量(liang)的(de)預冷PBS或細(xi)(xi)胞裂解(jie)液（臨(lin)用加入(ru)蛋(dan)白(bai)酶抑制劑）重懸細(xi)(xi)胞。通常6孔(kong)板一個孔(kong)的(de)細(xi)(xi)胞量(liang)需要150~250μL PBS重懸。
4.將(jiang)樣(yang)(yang)品(pin)放入-20℃或-80℃，使樣(yang)(yang)品(pin)冷凍(dong)，再(zai)放室溫(wen)解凍(dong)樣(yang)(yang)品(pin)，反復(fu)凍(dong)融幾次(ci)，使細胞(bao)充分裂(lie)(lie)解。也可將(jiang)樣(yang)(yang)品(pin)進行超聲破碎，以(yi)達到裂(lie)(lie)解的(de)目(mu)的(de)。
5.4℃10000×g 離心10min，除去(qu)細(xi)胞碎(sui)片，取上清，-20℃或-80℃保(bao)存，避免反復凍(dong)融。
組織勻漿液(ye)：
1.將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留(liu)的血液或(huo)雜質。
2.將組織塊稱重，記錄后剪碎(sui)，碎(sui)塊應(ying)盡量小，便于勻(yun)漿得更充分(fen)。
3.將組(zu)織按(an)一定的(de)(de)比例加入(ru)預冷的(de)(de)PBS（臨用加入(ru)蛋白酶抑制劑）勻漿，勻漿時置(zhi)于冰(bing)上(shang)或(huo)冰(bing)浴(yu)中。（通常按(an)組(zu)織重量(liang)：PBS體(ti)積(ji)=1:9的(de)(de)比例勻漿，例如1g的(de)(de)組(zu)織樣(yang)本對應9mL的(de)(de)PBS，具體(ti)體(ti)積(ji)可根據(ju)實驗需要適(shi)當調整，檢測后計算樣(yang)品(pin)濃度(du)時應乘以(yi)相應的(de)(de)稀釋倍數）。
4.吸取勻漿液到離心管，4℃5000×g 離心5~10min，取上(shang)清(qing)，-20℃或-80℃保存，避(bi)免反(fan)復凍融(rong)。
注意：樣本不含NaN3，因為NaN3會抑制HRP的(de)活性(xing)，從而導(dao)致(zhi)假陰性(xing)的(de)結(jie)果。
更多實(shi)驗資訊可咨(zi)詢(xun)我司業務員。上海(hai)恒遠生(sheng)物(wu)科(ke)技有(you)(you)限公司擁有(you)(you)自己的(de)實(shi)驗室，備有(you)(you)業的(de)技術(shu)研發團(tuan)隊，對于各種生(sheng)物(wu)試(shi)劑，細胞，血清，ELISA試(shi)劑盒的(de)研發與銷售，實(shi)驗提供(gong)(gong)免(mian)費(fei)代測(ce)服務，并提供(gong)(gong)精(jing)湛的(de)技術(shu)服務，如果您有(you)(you)實(shi)驗上的(de)問題(ti)歡(huan)迎來咨(zi)詢(xun)，為您提供(gong)(gong)業的(de)一(yi)(yi)對一(yi)(yi)技術(shu)指導。
原創(chuang)作(zuo)者：上(shang)海恒遠生物科技有(you)限公司
總訪問量：7389377 