【產品名稱】:大鼠抑制素結合蛋白試劑盒

【敏感性】： ＜5pg/ml

【特(te)異性】： 系統和(he)其它細胞(bao)因子無交叉(cha)反應(ying)。

【保(bao)存】： -20℃ [短期內（如兩(liang)周）可4℃]

【有效期】： 12個月（-20℃）。

【用(yong)(yong)途(tu)】： 用(yong)(yong)于體外定量分析液(ye)體標本（通用(yong)(yong)型）。

標本收集:

1.血(xue)清(qing)：全血(xue)標本請于室溫放(fang)置2小時或4℃過夜后(hou)于1000×g離(li)心20分鐘，取上(shang)清(qing)即可檢(jian)測，收集血(xue)液的試(shi)管應為一次(ci)性的無熱(re)原，無內(nei)毒素試(shi)管。

2.血(xue)(xue)漿：抗凝劑(ji)推薦使用EDTA，標(biao)(biao)本(ben)采(cai)集后(hou)30分(fen)鐘內于 1000×g離(li)心15分(fen)鐘，取上(shang)清即可檢測。避免使用溶(rong)血(xue)(xue)，高血(xue)(xue)脂標(biao)(biao)本(ben)。

3. 其它生物標(biao)本：1000×g離(li)心20分鐘，取(qu)上(shang)清即可檢測

4. 標(biao)本應清(qing)澈透明，懸浮物應離心(xin)去除。

5.標本收集后若不及時檢測(ce)，請按一次(ci)使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃電(dian)冰箱內(nei)，避免反復凍融，1-6月內(nei)檢測(ce),4℃保存的應在(zai)1周內(nei)進行檢測(ce)。

6. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標準品值，請根據實際情況，做適當倍數稀釋（建議先做預實驗，以確定稀釋倍數）。

試驗所需自備物品:

1.  酶標儀（450nm波(bo)長濾光片）

2.  高精(jing)度移液器，EP管及一次性吸頭(tou)：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl

3.  37℃恒溫箱, 雙蒸(zheng)水或去離子(zi)水

4.  吸水紙

檢測前準備工作:

1. 請提前(qian)20分(fen)鐘從冰(bing)箱中取(qu)出試劑盒，平衡至室溫。

2. 將濃縮洗(xi)滌(di)液(ye)(ye)用雙蒸水(shui)(shui)稀(xi)釋（1:25）。未用完的(de)放(fang)回4℃。從冰箱中取出(chu)的(de)濃縮洗(xi)滌(di)液(ye)(ye)可(ke)能有結晶，屬于(yu)正常(chang)現象，可(ke)用40℃水(shui)(shui)浴微加熱(re)使結晶完全溶(rong)解后再配制洗(xi)滌(di)液(ye)(ye)。（加熱(re)溫度不要超過50℃）使用時洗(xi)滌(di)液(ye)(ye)應為室溫。

3.  標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin): 加入(ru)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)&標(biao)(biao)本稀(xi)釋(shi)(shi)(shi)液(ye)(ye)1.0ml至凍(dong)干標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)中(zhong)，靜(jing)置10分鐘(zhong)，待其(qi)充分溶解后，輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)混勻（濃度(du)為(wei)5000 pg/ml）。然后根據需(xu)要進(jin)行倍比稀(xi)釋(shi)(shi)(shi)（注：不要直(zhi)接在(zai)板中(zhong)進(jin)行倍比稀(xi)釋(shi)(shi)(shi)）。建議配制成以(yi)下(xia)濃度(du)： 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39.05、0 pg/ml。樣品(pin)(pin)(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)(shi)(shi)液(ye)(ye)直(zhi)接作為(wei)空白(bai)孔 0 pg/ml。如(ru)配制2500pg/ml標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)：取(qu)0.5ml （不要少于0.5ml ）5000pg/ml的上述標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)加入(ru)含有0.5ml樣品(pin)(pin)(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)(shi)(shi)液(ye)(ye)的EP管(guan)中(zhong)，混勻即可，其(qi)余濃度(du)以(yi)此類推。

4. 生物素(su)化(hua)抗體(ti)工作(zuo)液(ye)：實(shi)驗前計(ji)算當次(ci)實(shi)驗所(suo)需用量（以100μl/孔(kong)計(ji)），實(shi)際配(pei)制(zhi)(zhi)時應多(duo)配(pei)制(zhi)(zhi)100-200μl。使用前15分鐘(zhong)，以生物素(su)化(hua)抗體(ti)稀釋液(ye)稀釋濃縮生物素(su)化(hua)抗體(ti)（1:100）成工作(zuo)濃度。當日使用。

5. 酶結合物工作液(ye)：實(shi)驗前計算(suan)當(dang)次實(shi)驗所需(xu)用量（以100μl/孔計），實(shi)際(ji)配制時應(ying)多配制  100-200μl。使用前15分(fen)鐘，以生物素化(hua)(hua)抗(kang)(kang)體稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)濃縮生物素化(hua)(hua)抗(kang)(kang)體（1:100）成工作濃度(du)。當(dang)日使用。

洗滌方法:

1. 自動(dong)洗(xi)(xi)板機：每孔加入洗(xi)(xi)滌液(ye)350μl，注入與吸(xi)出間(jian)隔60秒。洗(xi)(xi)板5次。

2. 手工(gong)洗板(ban)：甩(shuai)盡孔內液(ye)體，在潔凈的吸(xi)水紙上拍干(gan)，每孔加洗滌液(ye)350μl，浸泡(pao)1-2分(fen)鐘，吸(xi)去（不(bu)可觸及板(ban)壁(bi)）或甩(shuai)掉酶標(biao)板(ban)內的液(ye)體，在厚的吸(xi)水紙上拍干(gan)。洗板(ban)5次。

大鼠抑制素結合蛋白試劑盒操作步驟:

實驗(yan)開始前，各試(shi)劑均應平衡至室溫；試(shi)劑或樣品配制時，均需(xu)充分混勻(yun)，并盡量避免(mian)起泡。

1、 加(jia)樣(yang)：分(fen)別設空白(bai)孔、標(biao)準孔、待測(ce)樣(yang)品(pin)(pin)孔。空白(bai)孔加(jia)樣(yang)品(pin)(pin)稀釋液100μl，余孔分(fen)別加(jia)標(biao)準品(pin)(pin)或待測(ce)樣(yang)品(pin)(pin)100μl，注意不要(yao)有氣泡，加(jia)樣(yang)時將樣(yang)品(pin)(pin)加(jia)于酶(mei)標(biao)板(ban)底部，盡量不觸及孔壁(bi)，輕輕晃動混勻。給酶(mei)標(biao)板(ban)覆膜，37℃孵育2小時。為(wei)保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的(de)標(biao)準品(pin)(pin)溶液。

2、 棄去(qu)液(ye)體，甩干，每(mei)個(ge)孔中加入Detection Ab工作液(ye) 100μl（在使用前15分鐘(zhong)內(nei)配制），酶(mei)標板加上覆膜，37℃溫育1小時(shi)。

3、 棄去(qu)孔內(nei)液(ye)體，甩(shuai)干(gan)，洗(xi)板(ban) 3次，每(mei)次浸(jin)泡1-2分鐘，大(da)約350μl /每(mei)孔，甩(shuai)干(gan)并在吸水紙上輕拍將孔內(nei)液(ye)體拍干(gan)。

4、 每(mei)孔(kong)加(jia)(jia)HRP Conjugate工作液（臨(lin)用前15分(fen)鐘內配(pei)制）100μl，加(jia)(jia)上(shang)覆(fu)膜，37℃溫育1小時(shi)。

5、 棄(qi)去孔內液體，甩(shuai)干，洗(xi)板5次，方法同步驟3。

6、 每(mei)孔(kong)加底物溶液100μl，酶標(biao)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘(zhong)左右（根據實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過(guo)30分鐘(zhong)。當標(biao)準孔(kong)出(chu)現明顯梯度(du)時，即可終(zhong)止）。

7、 每孔加(jia)終止(zhi)液(ye)50μl，終止(zhi)反(fan)應，此時(shi)藍色(se)立(li)轉(zhuan)黃色(se)。終止(zhi)液(ye)的加(jia)入(ru)(ru)順序(xu)應盡量與底物液(ye)的加(jia)入(ru)(ru)順序(xu)相同。

8、 立即用(yong)酶(mei)標儀在450nm波長(chang)測量各孔的光密度(du)（OD值）。應提前打開酶(mei)標儀電源，預熱(re)，設置好檢測程(cheng)序。

9、 實(shi)驗完畢后將未(wei)用(yong)完的(de)試劑按規(gui)定的(de)保存溫度放回冰箱保存至有效期結束。

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更新時間：2024/4/18 9:12:46